“Fc Blocking”可以不做嗎?你是否經(jīng)常在流式染色實(shí)驗(yàn)中聽到這樣的疑問?
今天小達(dá)君就要給大家介紹一下什么是Fc 受體封閉劑,為什么需要做“Fc Blocking”。
在我們流式實(shí)驗(yàn)中,通常使用的抗體都是會有Fc段存在的,而細(xì)胞如果高表達(dá)Fc受體(比如巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞等),那么在抗體染色的過程中,很有可能抗體Fc段會與細(xì)胞表面的Fc受體進(jìn)行結(jié)合,從而產(chǎn)生非特異性的染色結(jié)果,最終導(dǎo)致流式實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽性/假陰性的存在。
因此,在流式實(shí)驗(yàn)過程中,除非檢測細(xì)胞中Fc受體的表達(dá),通常我們會使用純化的抗體來進(jìn)行Fc受體的封閉,如圖:
那么,是否你還有這樣的疑問,我用BSA做封閉可以嗎?其實(shí)呢,BSA是牛血清白蛋白,可以理解為牛來源的Ab,存在Fc段,用BSA理論上也可以使細(xì)胞表面的FcR不再結(jié)合流式抗體的Fc段。但是,牛來源的抗體的Fc段不一定能和目的細(xì)胞(人源、鼠源等)表面的FcR結(jié)合,所以封閉作用是有限的。如圖,沒有使用封閉劑但使用了BSA跟使用封閉劑的染色結(jié)果差異會特別大:
(OCI-AML3細(xì)胞系用TruStainFcX(Cat#101319)封閉(紅色TruStainFcX直方圖)以及用5%BSA封閉(藍(lán)色BSA直方圖)后,染APC-CD11b(cat#101211,cloneM1/70)結(jié)果)
因此,Fc受體的封閉需要使用專門針對于目的細(xì)胞的抗體效果是比較好的。
現(xiàn)在,你知道為什么需要做Fc Blocking了吧?接下來,小達(dá)君要給大家簡單介紹一下BioLegend最新推出的受體封閉劑TruStainFcX? PLUS(Cat#156603)。它可有效防止抗體與小鼠細(xì)胞的非特異的結(jié)合。其克隆號(clone:S17011E)染色結(jié)果更優(yōu)于之前的Fc受體封閉劑 TruStain FcX?(Cat#101319))克隆號(Clone:93),并且從抗體的用量上來說大大減少,可節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。
(將小鼠脾臟細(xì)胞分別用TruStainFcX TM PLUS(0.25μg/test,紫色填充直方圖),TruStainFcX TM(克隆93,1μg/test,紅線)封閉之后用CD90.2FITC染色,與未處理的小鼠脾臟細(xì)胞(黑線)作比較。結(jié)果顯示TruStainFcXTM PLUS封閉效果更優(yōu)。)
Description |
Size |
Cat. No. |
TruStain FcX? PLUS (anti-mouse CD16/32) Antibody |
50 μg/500 μg |
156603/156604 |
感興趣的話,趕快來試試吧?。?!
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