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【流式學(xué)習(xí)】γδT細(xì)胞：雖然我很少，但我很重要

作者：admin信息來源：達(dá)科為日期：2019年09月26日打印字體：大中小

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T 細(xì)胞表面抗原受體（T cell receptor, TCR ）主要分為αβ TCR 和γδ TCR 兩大類，αβTCR細(xì)胞大家都很熟悉了，今天小達(dá)君主要跟大家分享一下γδT細(xì)胞。γδT細(xì)胞是一群固有免疫樣的T淋巴細(xì)胞，多數(shù)表型為 CD3⁺CD4^－CD8^－，主要分布在外周血和粘膜組織中，僅占人外周血 T 細(xì)胞的5%~10%?？刹灰】?/span>γδT細(xì)胞，在受到刺激活化后一樣能發(fā)揮多種效應(yīng)功能，包括殺傷感染的細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞、分泌細(xì)胞因子和趨化因子、抗原遞呈功能及免疫調(diào)節(jié)功能。

γδT細(xì)胞的亞群：

Human：通常，人的γδT細(xì)胞根據(jù)其TCR基因重排過程中TCR δ鏈的不同主要分為兩大亞群：Vδ1T細(xì)胞亞群和Vδ2T細(xì)胞亞群，其中，與Vδ1T細(xì)胞對應(yīng)的TCRγ鏈主要為VγI基因家族成員（Vγ2/3/4/5/8），主要分布于黏膜和皮下組織中，在不同的組織中數(shù)量不等；Vδ2 T 細(xì)胞是γδ T 細(xì)胞的主要細(xì)胞群，其TCRγ鏈主要為VγII基因家族成員(Vγ9)，因此又叫 Vγ9Vδ2T 細(xì)胞，僅存在于靈長類動物和人體內(nèi)，主要分布于外周血中，占外周血淋巴細(xì)胞的0.5% ～10%。

Mouse：小鼠的γδT細(xì)胞由于其在體內(nèi)分布及功能特性的不同可分為不同的亞群。根據(jù)γδT細(xì)胞在發(fā)育過程中TCR基因重排時所選擇的Vγ鏈的不同，從結(jié)構(gòu)上可分為Vγ1-Vγ7，七個亞群。

活化與極化：

以人的γδT細(xì)胞為例，用不同的細(xì)胞因子以及磷酸化的抗原刺激后，靜息的γδT細(xì)胞可以極化為FoxP3⁺γδTreg、γδT17、γδTfh和γδT1，或成為活化的Vδ1T、Vδ2T細(xì)胞亞群。

功能：

γδT細(xì)胞具有多種功能，抗感染、抗腫瘤，在CAR-T治療中也發(fā)揮重要作用。

流式檢測：

以健康人的冷凍保存的PBMC為樣本，通過多色流式染色分析γδT細(xì)胞的分化階段。

樣本類型：健康人的冷凍保存的PBMC

抗體：

設(shè)門策略：

（A)

先通過FSC-A/SSC-A圈中淋巴細(xì)胞；
通過FSC-A/W排除粘連體；
通過SSC-A/W排除粘連體；
通過EMA死活染料排除掉死細(xì)胞；
圈中CD3^＋T淋巴細(xì)胞；
在CD3^＋T淋巴細(xì)胞中接著分析CD4^＋T細(xì)胞和CD8^＋T細(xì)胞的比例；因為人外周血中γδT細(xì)胞的表型基本都是CD4^－CD8^－，所以圈出CD4^－CD8^－雙陰性T細(xì)胞，準(zhǔn)備分析γδT表型；
圈中泛γδT細(xì)胞；
分析泛γδT細(xì)胞中的Vδ1^＋T細(xì)胞和Vδ2^＋T細(xì)胞 2個亞群的比例，以及Vδ1^－Vδ2^－T雙陰性細(xì)胞的比例；

(B)分析Vδ2^＋T細(xì)胞中CD27、CD28、CD45RA、CD16等標(biāo)記表達(dá)；

(C)分析Vδ1^＋T細(xì)胞中CD27、CD28、CD45RA、CD16等標(biāo)記表達(dá)。

γδT細(xì)胞的抗體清單：

BioLegend有很多檢測γδT細(xì)胞的流式抗體，不同種屬，多種熒光標(biāo)記，滿足您的實驗需求。

Item	Cat	Size	Clone
APC anti-human TCR γ/δ	331212	100 tests	B1
FITC anti-human TCR γ/δ	331208	100 tests	B1
PE anti-human TCR γ/δ	331210	100 tests	B1
PE/Cy7 anti-human TCR γ/δ	331222	100 tests	B1
PerCP/Cyanine5.5 anti-human TCR γ/δ	331224	100 tests	B1
Purified anti-human TCR γ/δ	331202	100 ug	B1
LEAF? Purified anti-human TCR γ/δ	331204	500ug	B1
Biotin anti-human TCR γ/δ	331206	100ug	B1
Alexa Fluor? 647 anti-human TCR γ/δ	331214	100 tests	B1
Brilliant Violet 421? anti-human TCR γ/δ	331218	100 tests	B1
Brilliant Violet 510? anti-human TCR γ/δ	331220	100 tests	B1
PE/Dazzle? 594 anti-human TCR γ/δ	331226	100 tests	B1
APC/Fire? 750 anti-human TCR γ/δ	331228	100 tests	B1
Purified anti-human TCR Vγ9	331301	25ug	B3
FITC anti-human TCR Vγ9	331306	100 tests	B3
PE anti-human TCR Vγ9	331308	100 tests	B3
APC anti-human TCR Vγ9	331310	100 tests	B3
PerCP anti-human TCR Vδ2	331410	100 tests	B6
FITC anti-human TCR Vδ2	331406	100 tests	B6
Pacific Blue? anti-human TCR Vδ2	331414	100 tests	B6
Alexa Fluor? 700 anti-human TCR Vδ2	331416	100 tests	B6
APC anti-human TCR Vδ2	331418	100 tests	B6
APC/Fire? 750 anti-human TCR Vδ2	331420	100 tests	B6
PE/Cy7 anti-human TCR Vδ2	331422	100 tests	B6
PerCP/Cyanine5.5 anti-human TCR Vδ2	331424	100 tests	B6
Brilliant Violet 421? anti-human TCR Vδ2	331428	100 tests	B6
Brilliant Violet 605? anti-human TCR Vδ2	331430	100 tests	B6
Brilliant Violet 510? anti-human TCR Vδ2	331432	100 tests	B6
PE/Dazzle? 594 anti-human TCR Vδ2	331426	100 tests	B6
Brilliant Violet 711? anti-human TCR Vδ2	331412	100 tests	B6
PE anti-human TCR Vδ2	331408	100 tests	B6
Purified anti-human TCR Vδ2	331402	100 ug	B6
Biotin anti-human TCR Vδ2	331404	100 ug	B6
Purified anti-mouse TCR γ/δ	107502	500ug	UC7-13D5
Brilliant Violet 421? anti-mouse TCR γ/δ	118119	125ul	GL3
FITC anti-mouse TCR γ/δ	118106	200 ug	GL3
Biotin anti-mouse TCR γ/δ	118103	50 ug	GL3
LEAF? Purified anti-mouse TCR γ/δ	107506	500 ug	UC7-13D5
Alexa Fluor? 488 anti-mouse TCR γ/δ	107512	100 ug	UC7-13D5
APC anti-mouse TCR γ/δ	118116	100 ug	GL3
PE anti-mouse TCR γ/δ	118108	100 ug	GL3
FITC anti-mouse TCR γ/δ	107504	500 ug	UC7-13D5
PE anti-mouse TCR γ/δ	107508	100 ug	UC7-13D5
Purified anti-mouse TCR γ/δ	118101	100 ug	GL3
LEAF? Purified anti-mouse TCR γ/δ	118114	500 ug	GL3
PerCP/Cyanine5.5 anti-mouse TCR γ/δ	118118	100 ug	GL3
Brilliant Violet 421? anti-mouse TCR γ/δ	118120	50 ug	GL3
PE/Cy7 anti-mouse TCR γ/δ	118124	100 ug	GL3
Alexa Fluor? 488 anti-mouse TCR γ/δ	118128	100 ug	GL3
Brilliant Violet 605? anti-mouse TCR γ/δ	118129	50 ug	GL3
Brilliant Violet 510? anti-mouse TCR γ/δ	118131	50 ug	GL3
Alexa Fluor? 647 anti-mouse TCR γ/δ	118134	100 ug	GL3
APC/Fire? 750 anti-mouse TCR γ/δ	118136	100 ug	GL3
APC anti-mouse TCR Vγ1.1/Cr4 Antibody	141108	100 ug	2.11
FITC anti-mouse TCR Vγ1.1/Cr4 Antibody	141104	100 ug	2.11
PE anti-mouse TCR Vγ1.1/Cr4 Antibody	141106	100 ug	2.11
PerCP/Cyanine5.5 anti-mouse TCR Vγ1.1/Cr4 Antibody	141112	100 ug	2.11
Pacific Blue? anti-mouse TCR Vγ1.1/Cr4 Antibody	141110	100 ug	2.11
Purified anti-mouse TCR Vγ1.1/Cr4 Antibody	141102	100 ug	2.11
APC anti-mouse TCR Vγ2 Antibody	137708	100 ug	UC3-10A6
FITC anti-mouse TCR Vγ2 Antibody	137704	200 ug	UC3-10A6
PE anti-mouse TCR Vγ2 Antibody	137706	200 ug	UC3-10A6
APC anti-mouse TCR Vγ3 Antibody	137506	100 ug	536
PE anti-mouse TCR Vγ3 Antibody	137504	100 ug	536
APC anti-mouse TCR Vδ6.3 Antibody	154806	100 ug	C504.17C
FITC anti-mouse TCR Vδ6.3 Antibody	154808	100 ug	C504.17C
PE anti-mouse TCR Vδ6.3 Antibody	154804	100 ug	C504.17C
Purified anti-mouse TCR Vδ6.3 Antibody	154802	500 μg	C504.17C
PE anti-mouse TCR Vδ4 Antibody	134905	25 μg	GL2
PE anti-mouse TCR Vγ1.1 + Vγ1.2 Antibody	142704	100 ug	4B2.9
Purified anti-mouse TCR Vγ1.1 + Vγ1.2 Antibody	142702	100 ug	4B2.9
PE anti-rat TCR γ/δ	202605	50 ug	V65

參考文獻(xiàn)：

Gamma-delta(γδ) T cells: friend or foe in cancer development? J Transl Med.
Six-of-the-best:unique contributions of γδ T cells toimmunology. Nat Rev Immunol.
OMIP‐020:Phenotypic characterization of human γδ T‐cells by multicolor flow cytometry. Cytometry A.

往期內(nèi)容鏈接：