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NATE拍了拍你，快用我提高轉(zhuǎn)染效率～
為什么轉(zhuǎn)染效率低？
真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中，外源核酸（如質(zhì)粒DNA）進(jìn)入細(xì)胞會(huì)遇到一些阻礙，一方面胞質(zhì)DNA和RNA感受器（如RIG-I樣受體，cGAS和炎癥小體）會(huì)識(shí)別這些外源核酸, 另一方面外源核酸需要避開防御性機(jī)制（如自噬），因此外源核酸引起的信號級聯(lián)激活通常會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率降低和細(xì)胞活力降低。
如何提高轉(zhuǎn)染效率？
NATE?是一款專門開發(fā)的核酸轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑，可抑制許多核酸感應(yīng)途徑，從而保護(hù)外源DNA并促進(jìn)其表達(dá)，用于提高難轉(zhuǎn)細(xì)胞（如THP-1和RAW 264.7）的轉(zhuǎn)染效率。與常用的轉(zhuǎn)染試劑（如GeneXPlus，Lipofectamine?LTX和jetPRIME?）、物理方法（電轉(zhuǎn)）以及慢病毒轉(zhuǎn)染等兼容，只需在轉(zhuǎn)染步驟前添加NATE?孵育30分鐘，即可進(jìn)行后續(xù)轉(zhuǎn)染操作。
NATE怎么用？
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向每瓶加入250ul DMSO進(jìn)行溶解；
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劇烈渦旋確保薄膜完全溶解；
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向瓶中加入250ul無菌去內(nèi)毒素水再次渦旋；
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分裝置于-20°C保存。
穩(wěn)轉(zhuǎn)/瞬轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)使用NATE
（以下是在THP-1和RAW264.7細(xì)胞的瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染中使用NATE的詳細(xì)步驟，該方案適用于多種瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，包括不同大小的細(xì)胞培養(yǎng)板（6/12/24孔板），不同的轉(zhuǎn)染方法和不同大小的質(zhì)粒）
a、細(xì)胞準(zhǔn)備
1. 如往常一樣，在完全培養(yǎng)基中準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞（如THP-1或RAW264.7）。
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RAW264.7轉(zhuǎn)染注意事項(xiàng)：在加入NATE和開始轉(zhuǎn)染步驟前，必須將細(xì)胞接種24h；
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THP-1轉(zhuǎn)染注意事項(xiàng)：轉(zhuǎn)染效率取決于細(xì)胞的培養(yǎng)方式。每三天將細(xì)胞分為起始密度至0.5 x 10^6 cells/ml；
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THP-1穩(wěn)轉(zhuǎn)注意事項(xiàng)：建議在轉(zhuǎn)染過程中使用豐富培養(yǎng)基（即在普通培養(yǎng)基中加入20%血清、20%條件培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、非必需氨基酸和抗氧化劑）；
b、添加NATE
2. 添加100 x NATE儲(chǔ)存液至終濃度為1 x。添加量（添加1%）根據(jù)使用的平板和培養(yǎng)基體積而變化。
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注意：例如，在轉(zhuǎn)染中使用1mL細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)，向細(xì)胞加入10 ul NATE。
3. 輕晃培養(yǎng)板使NATE均勻分布到細(xì)胞中。
4. 在正常細(xì)胞培養(yǎng)條件下孵育至少30分鐘。
c、轉(zhuǎn)染
5. 按照轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作（包括聚合物或脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，病毒轉(zhuǎn)染或電轉(zhuǎn)）。
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注意：如果轉(zhuǎn)染方法要求在轉(zhuǎn)染后短時(shí)間內(nèi)更換培養(yǎng)基，必須在新培養(yǎng)基中重新加入NATE。
6a. 對于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染：在適當(dāng)條件下培養(yǎng)24-48h，以便進(jìn)行基因表達(dá)的檢測。
6b. 對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：在轉(zhuǎn)染后2-4天使用抗生素進(jìn)行篩選。延遲篩選可使細(xì)胞狀態(tài)從轉(zhuǎn)染中恢復(fù)。
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THP-1細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)注意事項(xiàng)：當(dāng)選擇效率開始提高時(shí)，建議使用適當(dāng)試劑盒去除死細(xì)胞。
轉(zhuǎn)染使用舉例
（下表是使用NATE轉(zhuǎn)染THP-1或RAW264.7細(xì)胞的示例）
相關(guān)篩選抗生素
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6zshu.cn
www.invivogen.com
常見問題
Q1
NATE包裝瓶里看不到有東西是正常的嗎？
A1：產(chǎn)品量較少且是半透明薄膜形式，幾乎看不到，建議先進(jìn)行離心再溶解，最好不要打開瓶子的乳膠塞，可以打開鋁蓋后使用注射器將DMSO注入瓶內(nèi)進(jìn)行溶解。
Q2
NATE能否只用DMSO溶解？無菌無內(nèi)毒素水可用什么替代？
A2：說明書溶解條件是經(jīng)過優(yōu)化的，建議按照說明書步驟進(jìn)行溶解（先：DMSO；后：無菌去內(nèi)毒素水）；可使用醫(yī)用級注射用水替代。
InvivoGen 1977年成立于法國，是法國最早的生物科技公司。公司成立的初期階段主要提供細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑，如抗支原體、細(xì)菌、真菌污染的抗生素以及基因篩選抗生素（Blasticidin, Puromycin, Hygromycin B, G418, Zeocin）。隨著天然免疫研究熱點(diǎn)的興起，InvivoGen于2000年開始致力于天然免疫相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)，并成為全世界最優(yōu)質(zhì)、最專業(yè)的天然免疫相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)商。InvivoGen為天然免疫研究提供一整套研究方案，包括不斷更新的模式識(shí)別受體（PRRs）激動(dòng)劑和拮抗劑，PRRs報(bào)告基因細(xì)胞以及天然免疫信號通路的誘導(dǎo)劑和抑制劑等。
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