為讓您的流式實(shí)驗(yàn)更完善,結(jié)果更客觀理想,現(xiàn)列出實(shí)驗(yàn)所需的全套緩沖液:
420201 Cell Staining Buffer 是流式實(shí)驗(yàn)全程通用緩沖液,含有小牛血清,可降低抗體和熒光素的非特異性結(jié)合;含有細(xì)胞代謝抑制劑NaN3,可防止表面抗原的覆蓋。
胞內(nèi)染色實(shí)驗(yàn)中,在標(biāo)本活化的后期加入阻斷劑(蛋白運(yùn)輸抑制劑)通常比較重要,能夠防止胞內(nèi)因子分泌到胞外??筛鶕?jù)標(biāo)本的種類(lèi)選擇不同的阻斷劑。
420301 RBC Lysis Buffer (10X) 是一款用于裂解小鼠脾臟和人外周血中紅細(xì)胞的裂紅液。很溫和,對(duì)白細(xì)胞的影響很小。但對(duì)有核的紅細(xì)胞沒(méi)有裂解作用。
422401 RBC Lysis/Fixation Solution (10X) 是一款適用于人全血標(biāo)本染色的裂紅液,含有固定劑的成分,在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)對(duì)白細(xì)胞有固定作用。
某些細(xì)胞表面表達(dá) Fc 受體,可與免疫球蛋白(抗體)的 Fc 段發(fā)生結(jié)合,該結(jié)合對(duì)于抗原-抗體的特異性結(jié)合而言,是非特異性的,從而導(dǎo)致了背景的增加,甚至是假陽(yáng)性。因此對(duì)于檢測(cè)這些細(xì)胞的表面標(biāo)志時(shí),封閉抗體與 Fc 受體的結(jié)合是必須的。通常表達(dá) Fc 受體的細(xì)胞有 B 細(xì)胞、濾泡性 DC、 NK 細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等。
注意:422301 TruStain FcX? (Human) 并不影響 anti-human CD16 (clone 3G8), anti-human CD32 (clone FUN-2) 和 anti-human CD64 (clone 10.1) 與抗原的結(jié)合。
如果您要檢測(cè)胞漿內(nèi)的分子(如細(xì)胞因子),請(qǐng)使用以下固定破膜劑:
如果您要檢測(cè)核內(nèi)的分子,請(qǐng)使用以下固定破膜劑(注意:某些核內(nèi)抗原需要70% Ethanol 固定破膜,具體方法請(qǐng)見(jiàn)說(shuō)明書(shū)):
有時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后需要延遲一段時(shí)間才能上機(jī),或者實(shí)驗(yàn)需要中斷,此時(shí)需要相應(yīng)的 Buffer 來(lái)維持指標(biāo)的穩(wěn)定性:
422101 FluoroFix? Buffer 適用于任何 Protocol 中的固定步驟,因比其他款固定劑溫和,尤其適用于耦合熒光素的固定。標(biāo)本固定后,可以在 Cell Staining Buffer (Cat#:420201) 中4度避光保存兩天。
422501 Cyto-Last? Buffer 適用于分泌胞內(nèi)因子細(xì)胞的儲(chǔ)存。胞內(nèi)實(shí)驗(yàn)固定之后,標(biāo)本重懸在此 Buffer 中,4度避光可保存2周!