一個(gè)好的噬菌體抗體庫(kù)需要具備較大的容量和良好的多樣性，如果庫(kù)容量較小，則難以獲得高親和力的抗體。那么想要獲得較大庫(kù)容和多樣性豐富的噬菌體文庫(kù)，有哪些可以優(yōu)化的因素呢？
 

一、選擇高轉(zhuǎn)化效率的大腸桿菌（感受態(tài)細(xì)胞）

噬菌體文庫(kù)的庫(kù)容會(huì)受大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率的限制，選擇高效率的電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞，能有效的增加噬菌體文庫(kù)的庫(kù)容，另外也可以通過(guò)增加轉(zhuǎn)化次數(shù)來(lái)累積庫(kù)容。在噬菌體展示文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程中，使用比較多的感受態(tài)細(xì)胞有TG1、XL1-Blue、SS320等。

在進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時(shí)，要想獲得高的轉(zhuǎn)化效率，質(zhì)粒/連接產(chǎn)物的純度、電轉(zhuǎn)的條件、質(zhì)粒/連接產(chǎn)物的加入量以及操作的規(guī)范性也是需要注意的地方。

詳情可點(diǎn)擊：

https://mp.weixin.qq.com/s/fojfDFMTZvJFJ89DdCI2vw
 

達(dá)科為生物代理的LGC（Lucigen）提供轉(zhuǎn)化效率≧4×10¹⁰ cfu/μg的噬菌體文庫(kù)構(gòu)建感受態(tài)細(xì)胞~

申請(qǐng)方式

2、填寫(xiě)相關(guān)信息，審核通過(guò)即可免費(fèi)獲得試用裝?。總€(gè)用戶僅限申請(qǐng)一次，已購(gòu)買過(guò)該產(chǎn)品的用戶不參與此次活動(dòng)）

試用產(chǎn)品信息

高效噬菌體文庫(kù)構(gòu)建感受態(tài)——Phage Display ElectroCompetent Cells

• 
  

• 試用裝包含3種電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞【TG1, SS320 (MC1061 F'), ER2738】，每種感受態(tài)各4個(gè)反應(yīng)；

• 1、抗體或多肽噬菌體展示庫(kù)構(gòu)建的最佳選擇；

• 2、最高轉(zhuǎn)化效率的TG1感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率≧4×10¹⁰ cfu/μg；

• 3、具有琥珀和非琥珀抑制基因的靈活性選擇；

• 4、生成更大的基因文庫(kù)，加速研究發(fā)現(xiàn)。

• 
  

更多感受態(tài)細(xì)胞試用裝

二、輔助噬菌體投入量的優(yōu)化及改造

噬菌體擴(kuò)增的最終目的是將噬菌粒中單一拷貝的抗體片段基因通過(guò)噬菌體的擴(kuò)增過(guò)程變成10-100個(gè)拷貝。不同文庫(kù)大小的噬菌體庫(kù)在擴(kuò)增過(guò)程中需要的擴(kuò)增體積是不一樣的，要想獲得大庫(kù)容的噬菌體文庫(kù)，以下條件需要提前進(jìn)行計(jì)算評(píng)估。

1、擴(kuò)增過(guò)程中含有噬菌粒的大腸桿菌的數(shù)目和體積；

2、對(duì)應(yīng)加入多少輔助噬菌體進(jìn)行有效感染（一般輔助噬菌體和TG1的比值MOI在10-20：1時(shí)能保證所有的TG1被感染上）；

3、擴(kuò)增后加入多少含有噬菌粒的噬菌體進(jìn)行淘選（如果輔助噬菌體的展示效率只有10%，那最后要保證噬菌體抗體庫(kù)中每個(gè)抗體有10-100個(gè)抗體拷貝數(shù)的話，輔助噬菌體的投入量就應(yīng)該是文庫(kù)大小的100-1000倍）

注：輔助噬菌體在TG1處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)有比較好的感染效率，TG1處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的OD600值在0.4-0.8。（1OD代表的菌濃度為1×10⁹個(gè)/ml）。

另外，我們也可以選擇展示效率較高的輔助噬菌體，比如gIII基因缺失的Hyperphage（Progen, cat#PRHYPE）,它能使得抗體或多肽在噬菌體展示的拷貝數(shù)增多(up to 5 vs. 0.01) ，從而提高淘選的效率。

三、采用體內(nèi)重組技術(shù)進(jìn)一步增加噬菌體文庫(kù)的庫(kù)容和多樣性

Cre-loxp體內(nèi)重組系統(tǒng)可以有效增大抗體庫(kù)的庫(kù)容性，并且在對(duì)文庫(kù)進(jìn)行的每一輪篩選中，所有的抗體都可以再次進(jìn)行重組，保證了抗體庫(kù)的多樣性，因此該技術(shù)也為高容量抗體庫(kù)的發(fā)展提供了有利的工具。近期，YUAN DONG[1]等利用CreLoxP重組技術(shù)構(gòu)建了人源的scFv噬菌體文庫(kù)，并對(duì)antiPCSK9抗體進(jìn)行了篩選。

參考文獻(xiàn)

[1] YUAN DONG, FANWEI MENG,et.al. Construction and application of a human scFv phage display library based on CreLoxP recombination for antiPCSK9 antibody selection. INTERNATIONAL JOURNAL OF MOlecular medicine 47: 708-718, 2021.

Lucigen（美國(guó)）公司成立于1998年，提供各類用于分子生物學(xué)研究相關(guān)產(chǎn)品，可以使研究者成功克隆較難克隆的基因。2017年Lucigen成為Epicentre Technologies基因組試劑盒、酶和輔助試劑的獨(dú)家經(jīng)銷商。2018年該公司被英國(guó)LGC收購(gòu)，統(tǒng)一改名為Biosearch Technologies。目前產(chǎn)品線主要包括：體外轉(zhuǎn)錄、基因克隆（BAC克隆試劑盒）、感受態(tài)細(xì)胞（TG1噬菌體文庫(kù)構(gòu)建感受態(tài)）、體外擴(kuò)增、轉(zhuǎn)座子突變、蛋白表達(dá)、核酸提取、BHQ?探針、Stellaris?RNA FISH等。