CRISPR/Cas9核酸酶系統(tǒng)，是一個(gè)強(qiáng)大且高特異性的基因編輯工具。CRISPR/Cas9是一個(gè)雙組分系統(tǒng)，由gRNA引導(dǎo)Cas9核酸酶到基因組的特異性靶向序列，從而進(jìn)行基因編輯，如突變、插入或刪除。

jetCRISPR?是一種全新的專門為CRISPR/Cas9設(shè)計(jì)的RNP轉(zhuǎn)染試劑，可帶來更高的CRISPR基因編輯效率，同時(shí)保持極佳的細(xì)胞活性和狀態(tài)?？靵碓囋噧?yōu)異的CRISPR/Cas9 RNP轉(zhuǎn)染試劑吧！

jetCRISPR?專為高效轉(zhuǎn)染RNP(gRNA和Cas9蛋白復(fù)合物)而開發(fā)，可在多種類型細(xì)胞中進(jìn)行多靶點(diǎn)的高效Cas9基因編輯。(圖1和圖2)

圖1: 使用jetCRISPR?，在HeLa細(xì)胞中進(jìn)行高效基因編輯。

在96孔板中進(jìn)行HeLa細(xì)胞RNP轉(zhuǎn)染，每孔0.3 μl的jetCRISPR?試劑和幾種濃度的Cas9蛋白和HPRT1 SgRNA或陰性對照。轉(zhuǎn)染48h后，T7消化產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳分析并用BET染色，用G:Box紫外成像儀(Syngene^?)進(jìn)行成像。圖像經(jīng)Genesnap軟件(Syngene^?)采集，INDEL%使用Genetools軟件(Syngene^?)確定。

1: 完整的1083bp片段, 2: 827bp長片段, 3:  256bp短片段.

圖2: jetCRISPR?基因編輯效率優(yōu)于同類型產(chǎn)品

在96孔板培養(yǎng)的A549和HEK-293細(xì)胞中轉(zhuǎn)染RNP，每孔0.3 μl的jetCRISPR?或Lipofectamine? CRISPRMAX?，30 nM RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)。轉(zhuǎn)染48h后，采用T7核酸內(nèi)切酶方法計(jì)算INDEL%，評估基因編輯效率，INDEL%使用Genetools軟件(Syngene^?)確定。

Polyplus的轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞極其柔和，細(xì)胞因此能在整個(gè)轉(zhuǎn)染過程中保持極佳的活性和狀態(tài)。jetCRISPR?兼容血清和抗生素，因此RNP轉(zhuǎn)染可在利于細(xì)胞活性的優(yōu)化培養(yǎng)條件下進(jìn)行。 

圖3: jetCRISPR?轉(zhuǎn)染48h后，極佳的細(xì)胞活性和狀態(tài)

在96孔板中用30nm RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)和0.3 μl的jetCRISPR?轉(zhuǎn)染HEK-293和A549細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48h后，使用phase contrast ZOE Fluorescent Cell Imager (BIORAD^?)觀察細(xì)胞狀態(tài)。 

轉(zhuǎn)染Cas9蛋白比轉(zhuǎn)染質(zhì)粒， 可以更快的進(jìn)行基因編輯。使用jetCRISPR?轉(zhuǎn)染Cas9蛋白和gRNA可進(jìn)行快速可靠的基因編輯(圖4)。此外，Cas9蛋白可以比質(zhì)粒更快從細(xì)胞中被清除，從而減少了脫靶效應(yīng)，可以更特異的進(jìn)行基因編輯 (Kim S, et al; Genome Research 2014; 24:1012–1019)。

圖4: 在HEK-293細(xì)胞中，使用jetCRISPR?進(jìn)行快速可靠的基因編輯

在HEK-293細(xì)胞中進(jìn)行RNP轉(zhuǎn)染，96孔板每孔30nM RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)和0.3 μl的jetCRISPR?或0.3 μl的Lipofectamine^? CRISPRMAX?。轉(zhuǎn)染48h后，采用T7核酸內(nèi)切酶方法計(jì)算INDEL%，評估基因編輯效率，INDEL%使用Genetools軟件(Syngene^?)確定。

jetCRISPR?為即用型溶液。RNP轉(zhuǎn)染過程簡便：RNP復(fù)合體形成、加入轉(zhuǎn)染試劑、再加到孔中。jetCRISPR?適用于正向轉(zhuǎn)染和反向轉(zhuǎn)染，因此可以很方便的根據(jù)細(xì)胞調(diào)整實(shí)驗(yàn)操作，以獲得合適效果。使用反向轉(zhuǎn)染操作比正向轉(zhuǎn)染提前一天獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖5)。

圖5: jetCRISPR?正向轉(zhuǎn)染和反向轉(zhuǎn)染操作步驟

gRNA和Cas9成功進(jìn)入目標(biāo)細(xì)胞，是高效基因編輯必不可少的部分。然而，使用無DNA的方案，即Cas9以蛋白/gRNA復(fù)合物方式導(dǎo)入細(xì)胞，更有吸引力。因?yàn)樗朔薉NA入核的主要屏障，同時(shí)避免不必要的DNA整合。此外，導(dǎo)入Cas9蛋白更容易調(diào)控Cas9的表達(dá)，從而減少了Cas9核酸酶的脫靶活性。這是為什么科學(xué)家們需要可靠的轉(zhuǎn)染試劑，來實(shí)現(xiàn)這個(gè)應(yīng)用。

我們?yōu)镃RISPR實(shí)驗(yàn)提供了全套解決方案 (表1和圖6):

?jetCRISPR?轉(zhuǎn)染RNP –蛋白和gRNA共轉(zhuǎn)染

?jePRIME^?用于CRISPR DNA質(zhì)粒方案

?jetMESSENGER?用于RNA轉(zhuǎn)染(gRNA和mRNA共轉(zhuǎn)染)

?in vivo-jetPEI^?用于DNA活體轉(zhuǎn)染(Zuckermann et al. (2015) Nat Commun6, 7391; He et al. (2016) PLoSPathog 12. E1005743)

表1:專為CRISPR實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑

圖6：為CRISPR實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的體外轉(zhuǎn)染試劑

Polyplus-transfection^?，中文名保利嘉，是來自法國的一家專注核酸轉(zhuǎn)染的生物技術(shù)公司。因?yàn)閷Ｗ⑺詫I(yè)，其產(chǎn)品適用于體內(nèi)和體外轉(zhuǎn)染，包括DNA、siRNA及其他寡核苷酸、蛋白和多肽轉(zhuǎn)染。高效率、低毒性、操作簡便和高性價(jià)比的產(chǎn)品受到廣大科研工作者喜愛，廣泛應(yīng)用于基因功能研究、蛋白生產(chǎn)、病毒包裝和動(dòng)物模型的構(gòu)建。公司于2002年獲得ISO9001證書。