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提高BAC，F(xiàn)osmid文庫拷貝數(shù)，您只差了一支誘導劑
首先安利一下Epicentre的專利技術——CopyControl?克隆系統(tǒng)，能夠讓您共享單拷貝和高拷貝的優(yōu)點。CopyControl?克隆：首先以單拷貝形式生長，單拷貝可以確保插入穩(wěn)定及成功克隆編碼基因序列；在需要的時候，通過誘導液誘導成高拷貝克隆，以便下游應用所需。這一系統(tǒng)可以用來構建PCR克隆，對于BAC，F(xiàn)osmid文庫等大型質(zhì)粒格外有用。
CopyControl?克隆系統(tǒng)有兩個重要成分，相輔相成，缺一不可：
1．CopyControl? pCC1和pCC2載體
pCC1和pCC2載體含有兩個復制起始位點：單拷貝的大腸桿菌F-因子復制子和誘導型的高拷貝oriV。其中OriV的啟動，需要trfA基因產(chǎn)物，由CopyControl?的另一個重要成分——TransforMax? EPI300 E.coli菌株提供。
圖1 pCC1載體圖譜
2．TransforMax? EPI300 E.coli
這是一種工程菌株，含有受誘導啟動子控制的trfA基因，在誘導的條件下可以提供啟動oriV所需要的trfA基因產(chǎn)物。
圖2 TransforMax? EPI300 E.coli菌株基因型
CopyControl?克隆誘導步驟
圖3 CopyControl?克隆流程
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