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InvivoGen綜述:芳香烴受體(AhR)在腸道微生物群和免疫中的關(guān)鍵作用

作者:admin 信息來(lái)源:達(dá)科為 日期:20190618 打印 字體:  
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芳香烴受體(AhR)是一種配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子,在屏障組織中的免疫,上皮,內(nèi)皮和基質(zhì)細(xì)胞中廣泛表達(dá)1。過(guò)去的研究集中關(guān)注AhR跟二噁英等化學(xué)污染物的關(guān)系,但最新研究表明AhR是參與更廣泛環(huán)境變化應(yīng)答的中心傳感器,以確保宿主和腸道微生物群之間的腸內(nèi)穩(wěn)態(tài)1。

典型AhR訊號(hào)已經(jīng)被廣泛綜述過(guò)1。簡(jiǎn)而言之,在沒(méi)有配體的情況下,AhR位于細(xì)胞質(zhì)中Hsp90:XAP2:p23:Src伴侶蛋白復(fù)合物內(nèi),當(dāng)配體結(jié)合時(shí),復(fù)合物發(fā)生構(gòu)象變化并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中。伴侶蛋白被釋放,AhR和AhR核轉(zhuǎn)位子(ARNT)異源二聚。在細(xì)胞核中,AhR:配體:ARNT三聚體與AhR靶基因上游調(diào)節(jié)區(qū)域的二噁英應(yīng)答元件(DRE)結(jié)合,以控制包括細(xì)胞色素P450依賴性單加氧酶Cyp1a1、AhR 抑制因子(AhRR)和IL-22白細(xì)胞介素的轉(zhuǎn)錄。值得注意的是,無(wú)輪是在基因組水平上通過(guò)與其他轉(zhuǎn)錄因子(例如NF-κB)相關(guān)聯(lián),還是在非基因組水平上(例如通過(guò)釋放Src激酶),非典型AhR信號(hào)通路也有被報(bào)道過(guò)2,3。

除了像2,3,7,8-四氯雙苯環(huán)二噁英(TCDD)的環(huán)境中的異質(zhì)物,多種膳食來(lái)源的AhR配體也已經(jīng)被鑒定出,而其中許多是色氨酸(Trp)氨基酸代謝的副產(chǎn)物4?,F(xiàn)在AhR已被認(rèn)知為宿主微生物群落共生的調(diào)節(jié)因子。一方面,膳食配體激活的AhR幫助塑造腸道細(xì)菌組成5,另一方面,AhR傳感能夠調(diào)節(jié)腸道免疫細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)和功能6

腸道微生物群的色氨酸代謝會(huì)產(chǎn)生AhR激動(dòng)劑,以支持腸道里3型固有淋巴細(xì)胞(ILC3)的發(fā)育和維持,而作為天然免疫系統(tǒng)的ILC3則對(duì)應(yīng)獲得性免疫系統(tǒng)的CD4 T細(xì)胞,后者主要產(chǎn)生IL-17和IL-22(對(duì)應(yīng)Th17/22)。AhR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)也是維持產(chǎn)生IL-22的上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(IELs)所必需的, IL-22參與腸上皮細(xì)胞(IECs)粘膜創(chuàng)傷愈合和抗微生物肽(AMPs)的產(chǎn)生6。腸道內(nèi)的AhR-IL-22信號(hào)通路不但在宿主防御微生物病原體方面起著重要作用,而且能提升疾病耐受性以限制有害影響,對(duì)于這方面,越來(lái)越多的研究也表明了AhR激活的強(qiáng)度與CD4 T細(xì)胞應(yīng)答的關(guān)系。AhR弱激活支持促炎癥反應(yīng)(Th17/22),而AhR強(qiáng)激活則促進(jìn)誘導(dǎo)耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)6-8。

AhR參與調(diào)節(jié)促炎反應(yīng)和耐受反應(yīng)的機(jī)制可以從多方面解釋?zhuān)饲拔奶徇^(guò)可以導(dǎo)致IL-22產(chǎn)生的典型AhR信號(hào),AhR也通過(guò)非基因組途徑導(dǎo)致至少兩個(gè)抑制性效果。研究發(fā)現(xiàn)與AhR相關(guān)的Src激酶能夠磷酸化吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO1),進(jìn)而激活NF-κB轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)DCs中抑制性細(xì)胞因子TGF-β(transforminggrowth factor)的轉(zhuǎn)錄,達(dá)到抑制小鼠對(duì)LPS的過(guò)度應(yīng)答9。此外, IDO1對(duì)Trp的降解提供了例如L-型犬尿氨酸(L-Kynurenine)的AhR激動(dòng)劑,提示了這通路與Treg的產(chǎn)生有關(guān)9。在巨噬細(xì)胞中,AhR另一個(gè)抑制作用是在LPS誘導(dǎo)下,AhR協(xié)同Src激酶和STAT3信號(hào)通路產(chǎn)生抗炎細(xì)胞因子IL-10。值得留意的是,TLR4對(duì)LPS的識(shí)別可促進(jìn)巨噬細(xì)胞中AhR的表達(dá),但目前尚不清楚在其他模式識(shí)別受體配體刺激的情況下是否也是如此10。

雖然目前尚不清楚失衡是原因還是后果,但是可以確定的是腸道微生物-免疫細(xì)胞失調(diào)與一系列的疾病有關(guān)。在炎癥性腸病中,由于腸道微生物衍生的AhR配體濃度降低,免疫細(xì)胞趨向于表達(dá)低水平AhR和展現(xiàn)較低的AhR活性2,11,另一方面,大腸癌患者顯示出腸道微生物群改變和支持免疫應(yīng)答抑制的癥狀,包括AhR表達(dá)增加,慢性IDO1激活,腫瘤微環(huán)境中Trp濃度降低11;相反,有腸道癥狀的脊椎關(guān)節(jié)炎患者腸道微生物多樣性和Trp分解代謝較低,與炎癥反應(yīng)相一致11。此外,研究也指出循環(huán)微生物分解代謝物之中,Trp代謝物濃度的降低與多發(fā)性硬化的發(fā)病機(jī)制有關(guān)3,因此,AhR不僅在腸道內(nèi)甚至在其他部位都對(duì)腸道微生物和宿主體內(nèi)穩(wěn)態(tài)起著關(guān)鍵作用。AhR通路的調(diào)制是一種有吸引力的治療策略,然而,要達(dá)到優(yōu)化和應(yīng)用AhR靶向藥物,我們必須更深入地了解在不同細(xì)胞環(huán)境中,以及不同劑量或來(lái)源的配體對(duì)AhR分子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。

*參考文獻(xiàn)請(qǐng)?jiān)L問(wèn):https://www.invivogen.com/ahr-gutmicrobiota-immunity-review

InvivoGen提供芳烴受體(AhR)系列研究產(chǎn)品

AhR配體產(chǎn)品——激動(dòng)劑和抑制劑

AhR能夠廣泛感知結(jié)構(gòu)上不同的外源性和內(nèi)源性分子。已被發(fā)現(xiàn)的AhR激動(dòng)劑包括產(chǎn)生于外界環(huán)境中的外源化合物,如污染物;以及在胃和腸道中和其他器官中,由于光氧化或氧化應(yīng)激而轉(zhuǎn)化的吲哚代謝物。 InvivoGen提供多種膳食來(lái)源的AhR配體及其合成的AhR拮抗劑,以滿足您的研究需要。

  • 高質(zhì)量: 純度>95%,無(wú)菌過(guò)濾,確認(rèn)無(wú)細(xì)菌污染

  • 功能測(cè)試:使用 HepG2-LuciaTM AhR和HT29-LuciaTM AhR細(xì)胞(見(jiàn)下文)

  • AhR激動(dòng)劑

AhR配體有著多種不同的結(jié)構(gòu),并且對(duì)小鼠和人AhR的親和力有顯著差異1。原型高親和力AhR激動(dòng)劑,外源化合物 2,3,7,8-四氯雙苯環(huán)二噁英(TCDD)對(duì)小鼠 AhR 的親和力比人AhR高10倍;相反,可能由于進(jìn)化過(guò)程,膳食衍生的吲哚代謝物對(duì)人類(lèi)AhR具有更好的親和力1,2。

  1. ITE 2-(1′H-吲哚-3 ′-羰基)-噻唑-4-羧酸甲酯(ITE)是一種基于吲哚的AhR配體,來(lái)源被認(rèn)為是胃部中硫代葡萄糖苷(十字花科蔬菜中發(fā)現(xiàn)的代謝產(chǎn)物)的轉(zhuǎn)化,或者由于色氨酸和半胱氨酸之間的縮合反應(yīng)而產(chǎn)生的1,3。

  2. L-Kynurenine Plus L-Kynurenine Plus是L-型犬尿氨酸(L-Kynurenine)的制備物,而 L-Kynurenine 則是色氨酸通過(guò)細(xì)胞中的犬尿氨酸代謝途徑上產(chǎn)生的化合物(占色氨酸代謝的90%以上)2,3

  3. FICZ(6-甲酰基吲哚并[3,2-b]咔唑)是一種高效價(jià)AhR配體。在紫外光氧化或H2O2氧化應(yīng)激作用下由色氨酸轉(zhuǎn)化而型成2,3

  • AhR抑制劑——CH-223191

CH-223191(2-甲基-2H-吡唑-3-羧酸)是AhR的合成拮抗劑,最初被描述為T(mén)CDD的競(jìng)爭(zhēng)配體1。有趣的是,比起多環(huán)芳香烴和非鹵代芳香烴如FICZ和ITE,CH-223191更能有效抑制鹵代芳香烴如TCDD,說(shuō)明其具有配體選擇性拮抗作用2。

芳香烴受體報(bào)告細(xì)胞

InvivoGen提供兩個(gè)AhR報(bào)告細(xì)胞系,分別改造自人HT29結(jié)腸腺癌和HepG2肝癌細(xì)胞系。HT29-Lucia?AhR細(xì)胞和HepG2-Lucia? AhR細(xì)胞有助于研究AhR激活作用,可以幫助了解多種激動(dòng)劑如外源物質(zhì)和飲食衍生的吲哚產(chǎn)物對(duì)AhR的激活反應(yīng)。最重要的是,我們的AhR報(bào)告細(xì)胞是人源細(xì)胞,并且內(nèi)源性表達(dá)人AhR,這使得它們與人類(lèi)樣本中篩選內(nèi)源性AhR激動(dòng)劑高度相關(guān)。

  1. HT29-LuciaTM AhR Cells

  2. HepG2-LuciaTM AhR Cells

HT29-Lucia?AhR細(xì)胞和HepG2-Lucia?AhR細(xì)胞通過(guò)監(jiān)測(cè)Cyp1a1誘導(dǎo)的Lucia熒光素酶活性提示AhR激活狀況。微粒體細(xì)胞色素P450依賴性單氧化酶Cyp1a1基因是重要的AhR靶基因,在這兩個(gè)細(xì)胞系中,Lucia熒光素酶報(bào)告基因都在人Cyp1a1的完整調(diào)控序列的控制之下。當(dāng)配體結(jié)合時(shí),細(xì)胞質(zhì)AhR發(fā)生構(gòu)象改變,跨膜進(jìn)入細(xì)胞核,并與ARNT結(jié)合,以結(jié)合Cyp1a1調(diào)節(jié)序列中的二惡英反應(yīng)元件(DRE)。 AhR的激活可以通過(guò)QUANTI-Luc?測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清中分泌的熒光素酶活性來(lái)評(píng)估。HT29-Lucia? AhR細(xì)胞和 HepG2-Lucia? AhR細(xì)胞對(duì)Zeocin?具有抗性。兩種細(xì)胞系都用TCDD、FICZ、ITE和L-KynureninePlus(L-型犬尿氨酸的制備物)進(jìn)行了功能測(cè)試。

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

貨號(hào)

品牌

HepG2-Lucia? AhR cells

3-7 x 106cells

hpgl-ahr

InvivoGen

HT29-Lucia? AhR cells

3-7 x 106cells

ht2l-ahr

FICZ

1 mg

tlrl-ficz

ITE

10 mg

tlrl-ite

L-Kynurenine Plus

10 mg

tlrl-kynp

CH-223191

10 mg

inh-ch22

Quanti-Luc?

2 pouches (2 x 25 ml)

rep-qlc1

Quanti-Luc? Gold

1 pouch (25 ml)

rep-qlcg1

Zeocin?

5 x 1 ml

ant-zn-05

腸道微生物群研究相關(guān)細(xì)胞系

利用模式識(shí)別受體(PRR)檢測(cè)病原體是啟動(dòng)先天免疫應(yīng)答的關(guān)鍵。此外,PRR使許多不同的共生細(xì)菌、真菌和病毒能夠?qū)δc道粘膜進(jìn)行微生物定植。研究最為透徹的PRR是Toll樣受體(TLR)、C型凝集素受體(CLR)和細(xì)胞內(nèi)核苷酸寡聚化結(jié)構(gòu)域(NOD)樣受體(NLR)1,2。

  1. TLR Reporter Cells

  2. NOD1/2 Reporter Cells

  3. Dectn-1a/b Reporter Cells

InvivoGen提供大量人和鼠PRR報(bào)告細(xì)胞系以及其激動(dòng)劑以滿足您的研究需要。HEK-Blue?報(bào)告細(xì)胞系是一系列從人胚胎腎細(xì)胞(HEK293)衍生的細(xì)胞系,其設(shè)計(jì)用于通過(guò)監(jiān)測(cè)NF-κB的活化來(lái)研究各種PRR信號(hào)通路。HEK-Blue?細(xì)胞被轉(zhuǎn)染并過(guò)表達(dá)目標(biāo)PRR基因,此外,HEKBlue?被轉(zhuǎn)染分泌性胚胎堿性磷酸酶(SEAP)報(bào)告基因,由融合了五個(gè)NF-κB和AP-1結(jié)合位點(diǎn)的最小啟動(dòng)子調(diào)控。PRR配體如二?;鞍缀腿;鞍祝ǚ謩e為T(mén)LR2/TLR6、TLR2/TLR1)、胞漿肽聚糖(NOD1/2)或β-葡聚糖(Dectin-1a/b)刺激均可激活NF-κB和AP-1,誘導(dǎo)SEAP的產(chǎn)生。使用InvivoGen的QUANTI-Blue?溶液則能夠輕易檢測(cè)SEAP的水平。

產(chǎn)品

規(guī)格

貨號(hào)

品牌

HEK-Blue? hTLR2

3-7 x106cells

hkb-htlr2

InvivoGen

HEK-Blue? hTLR2-TLR1

3-7 x106cells

hkb-htlr21

HEK-Blue? hTLR2-TLR6

3-7 x106cells

hkb-htlr26

HEK-Blue? hTLR3

3-7 x106cells

hkb-htlr3

HEK-Blue? hTLR4

3-7 x106cells

hkb-htlr4

HEK-Blue? hTLR5

3-7 x106cells

hkb-htlr5

HEK-Blue? hTLR9

3-7 x106cells

hkb-htlr9

HEK-Blue? hNOD1

3-7 x106cells

hkb-hnod1

HEK-Blue? hNOD2

3-7 x106cells

hkb-hnod2

HEK-Blue? hDectin-1a

3-7 x106cells

hkb-hdect1a

HEK-Blue? hDectin-1b

3-7 x106cells

hkb-hdect1b

更多信息請(qǐng)?jiān)L問(wèn)網(wǎng)站:www.invivogen.com/reporter-cells

*參考文獻(xiàn)請(qǐng)?jiān)L問(wèn):https://www.invivogen.com/ahr-gutmicrobiota-immunity-review

QUANTI-Blue?溶液—用于 SEAP 檢測(cè)的液體制劑

  1. 易于制備: 簡(jiǎn)單混合兩種試劑即可

  2. 提供方便: 可直接加入細(xì)胞培養(yǎng)

  3. 適應(yīng)性: 用于高通量篩選(HTS)

InvivoGen的液體新制劑QUANTI-Blue?通過(guò)觀察培養(yǎng)基從粉色到紫色/藍(lán)色的簡(jiǎn)單顏色變化,提供了分泌性胚胎堿性磷酸酶(SEAP)的高靈敏度和快速檢測(cè)方案。重點(diǎn)是,使用QUANTI-Blue?溶液與粉末檢測(cè)結(jié)果相同,但溶液更易于使用;我們提供了高濃度的QUANTI-Blue?液體制劑(100X),因此可以適應(yīng)您各種需要,而且為了迎合不同樣本大小,優(yōu)化工作濃度在1X~10X之間;此外,它可以直接添加到培養(yǎng)皿中的細(xì)胞中,使其成為適合高通量篩選的理想產(chǎn)品。

QUANTI-Blue?溶液可用于其他InvivoGen 的SEAP報(bào)告細(xì)胞系。

產(chǎn)品

規(guī)格

貨號(hào)

品牌

QUANTI-BlueTMSolution

5 ml

rep-qbs

InvivoGen

QUANTI-BlueTMSolution

Bulk

Please enquire


隨著天然免疫研究熱點(diǎn)的興起,InvivoGen于2000年開(kāi)始致力于天然免疫相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn),并成為全世界最優(yōu)質(zhì)、最專(zhuān)業(yè)的天然免疫相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)商。InvivoGen為天然免疫研究提供一整套研究方案,包括不斷更新的模式識(shí)別受體(PRRs)激動(dòng)劑和拮抗劑,PRRs報(bào)告基因細(xì)胞以及天然免疫信號(hào)通路的誘導(dǎo)劑和抑制劑;也提供細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑,如抗支原體、細(xì)菌、真菌污染的抗生素以及基因篩選抗生素等。



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